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微生物知识点35（第4页）

用于病毒的分离鉴定和抗病毒药物筛选研究。

常用的细胞培养类型

原代细胞:恒河猴肾细胞、人胚肾、肺等细胞，鸡胚成纤维细胞

二倍体细胞株:猪肾细胞系（pk-）、恒河猴胚细胞株（hl-）、犬肾细胞系

传代细胞系:hea细胞、detroit细胞（胸骨髓细胞系），gcilk（人结膜c、肠i、肝l与肾k细胞系），vero（绿猴肾细胞系），bhk-（幼地鼠肾细胞系）

病毒理化特性的测定

（）病毒核酸型鉴定（单股双股dnarna正链负链新病毒→逐渐缩小范围）

卤化核苷酸法→检测为dna还是rna病毒

放线菌素d法

吖啶橙（ao）染色法

绿豆芽酶：

该酶可降解单核酸，可以测定核酸的股数

（）耐酸性试验

（）脂溶性试验

（）耐热性试验等

病毒的血清学和分子生物学鉴定

病毒分离后，可用已知的抗病毒血清或单克隆抗体，对分离毒株进行血清学鉴定，已确定病毒的种类、血清型及其亚型。

分子生物学技术鉴定病毒

第二节病毒感染单位的测定

测定样本中病毒的浓度，即病毒的滴度是病毒学中最重要的技术之一。

病毒滴度可以通过用稀释的病毒接种细胞培养、鸡胚或实验动物，检测其增殖情况而确定。

常用于病毒滴度测定的技术有空斑试验、终点稀释法等。

终点稀释法：

（）用途：

测定病毒滴度

确定病毒对动物的毒力或毒价

（）方法：

将病毒做系列稀释，选个稀释度，接种一定数量的细胞、鸡胚或动物，每个稀释度做个重复

→问tcido、ido、ldo、eldo、eido

第三节病毒颗粒的检测

电镜技术常用于直接检测病毒颗粒

用血凝试验和病毒酶活性测定

电镜技术：

最直观观察病毒颗粒的方法。但e检测样本中必须有一定量的病毒颗粒，如少于o则不易检出

可用磷钨酸盐等重金属盐直接做负染而后观察，适用于观察病毒表面结构。

器官组织样本则须做薄切片后再做负染观察。可观察细胞内的病毒结构，如冠状病毒、逆转录病毒在组织中出芽的病毒颗粒等。

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